Problemas en la preparación del medio de cultivo

Variaciones en el pH esperado

Hay muchos factores que influyen en el pH. Unos de ellos es el sobrecalentamiento.

El uso de Agua inadecuada o no apropiada también puede ser otra razón, así como una mala determinación del pH. Por último, la contaminación en el material de vidrio usado también pueden contribuir en el cambio de pH. Se describen a continuación cada punto:

El sobrecalentamiento puede deberse a:

• Un exceso de esterilización.
• Una mezcla no homogénea.
• Fusión repetida del medio.
• Almacenaje indebido.

Una manera de solucionarlo es asegurarse de que el tiempo y temperatura de calentamiento no se exceda y se trabaje bajo condiciones adecuadas.

Agua no apropiada. Se debe tener en consideración las siguientes notas:

• El agua destilada empleada debe tener una conductividad menor a 15 µS y un pH entre 5.5 y 7.
• Los equipos de desionización son regenerados con ácidos y bases que pueden dejar residuos en el agua causando variación de pH.
• El agua, cuando no es fresca, debe absorver CO₂ de la atmosfera.

Determinación del pH:

La composición del medio de cultivo está ajustada para dar un pH correcto después de la reconstitución y esterilización. En el caso de que se indique que el medio debe suplementarse, el pH indicado en la ficha técnica se refiere al pH con el medio completo. El ajuste no debe hacerse antes del autoclave.

Las razones de obtener diferentes lecturas de pH se deben a:

• Medición de pH a una temperatura fuera de especificación.
• Electrodo no apropiado.
• El medio está demasiado caliente.
• Los productos con agar se encuentran de forma sólida a temperatura ambiente y requieren de un electrodo plano para facilitar la medición. En estos casos, no es recomendable la compensación de temperatura. Sugerimos el uso de electrodos con las siguientes especificaciones:
  • Rango de pH: 2.0 a 11.0.
  • Temperatura de trabajo: 0.0 a 80ºC.
  • Electrolito de referencia: polimerizado y sin cloruro de plata.
  • Diafragma: abierto.
  • Vida útil: de 4 a 6 meses en función de su uso.
• Los caldos son productos líquidos y recomendamos realizar pruebas de pH que sean resistentes a proteínas y permitan lecturas rápidas. Los electrodos de triple diafragma de cerámica y alta sensibilidad de su membrana tienen las siguientes especificaciones:
  • Rango de pH: 0.1 a 12.0.
  • Temperatura de trabajo: 0.0 a 100ºC.
  • Sistema de referencia: cristales de plata / cloruro de plata encapsulado, electrolito CRIOLYT-G.
  • Diafragma: tres tipos de cerámica.
  • Vida útil: 1 año si se usa correctamente.
• Por favor, recalibrar el equipo de pH con soluciones de pH Scharlau.
• No se recomienda el uso de la compensación de temperatura.

Contaminación:

Asegúrate de que el material de vidrio empleado sea de calidad apropiada para la preparación de medio de cultivo. Evitar el uso de vidrio de soda.

Enjuagar el vidrio antes de su uso para conseguir que sea un material neutro.

Fusión de agares al microondas

Actualmente no hay un protocolo específico descrito para la fusión de medios de cultivo en el microondas pero Scharlau recomienda seguir los siguientes pasos siempre que se usen botellas con un tapón compatible para el microondas, ya sea de plástico como metálico.

Se sabe que los componentes metálicos no son recomendados de introducir en el microondas, no obstante, Scharlab ha desarrollado un tapón metálico exclusivo que permite la fusión del agar en el microondas, mejorando el tiempo de fusión que se dedica cuando se usan baños de agua.

Las recomendaciones son las siguientes:

• Colocar el frasco en un vaso de precipitados con agua para asegurar una distribución de la temperatura de forma uniforme.
• Insertar en el microondas.
• Después de aplicar calor, observar y agitar para facilitar una disolución completa del agar.
• Si el agar no se funde completamente, poner el vaso de precipitados en el microondas de nuevo hasta que se observe una apariencia homogénea.
• Verter el agar en placas de forma estándar.

Interpretación de resultados

Se recomienda revisar el certificado de análisis que se edita para cada lote de medio. En el certificado se indica no sólo las cepas analizadas, sino el resultado de productividad y selectividad del medio. Se incluyen además fotos a color de los crecimientos típicos.

Resultados cuantitativos no esperados

Encontraríamos:

• Sobrecalentamiento.
• Fusiones repetidas del mismo medio.
• Mezcla inapropiada.
• Características del inóculo: adición de inhibidores o electrolitos excesivos en el inóculo.

Se recomienda revisar la caducidad de las botellas empleadas y el aspecto general del producto deshidratado. La humedad suele degradar peptonas contenidas en la fórmula.

El contacto con el aire puede oxidar cualquier suplemento de la fórmula, la exposición a la luz solar también puede alterar el color del medio.

Asegúrese de que cada botella está cerrada de forma apropiada y almacenada en un lugar seco y resguardado de la luz solar.

Recepción de placas preparadas

Las placas son productos muy sensibles a los cambios bruscos de temperatura. Una vez fuera de nuestras instalaciones, es complicado poder controlar todos los factores que pueden dar lugar a alteraciones del producto.

Se trata de productos fabricados en salas limpias ISO 7 no estériles. Scharlab ha optimizado sus procesos y ha logrado trabajar con un AQL <0,5%.

Todos nuestros envíos de medios de cultivo preparados dentro España se realizan en camiones que registran la bajo temperatura a la que se somete el producto transportado. Este registro de temperaturas puede ser consultado a través del enlace suministrado en el correo automático de aviso de salida de la mercancía. En caso de tener algún problema con el producto, este documento puede ser útil para investigar la causa.

De manera general, a la recepción en sus instalaciones de estos productos, recomendamos seguir las instrucciones de conservación que se indican en la misma caja o en la documentación técnica del producto. En caso de que las condiciones de conservación sean en nevera o cámara frigorífica (2-14ºC), es importante recordar que el producto no debe tocar las paredes del equipo, para evitar su congelación.

Tanto para ampliar estas informaciones como para solicitar otros productos o servicios escribe a consultas@scharlab.com.